一、色譜系統(tǒng)（LC）參數(shù)

1.色譜柱類(lèi)型

-反相柱（C18）：適合脂溶性代謝物（脂質(zhì)、甾體等），選1.7-2.1μm粒徑，柱長(zhǎng)50-150mm。

-親水柱（HILIC）：覆蓋極性代謝物（氨基酸、糖類(lèi)），需搭配高乙腈流動(dòng)相。

*建議：雙平臺(tái)（RP+HILIC）可提升代謝物覆蓋率。*

2.梯度與流速

-梯度時(shí)長(zhǎng)：非靶向研究建議15-25分鐘（平衡分離與通量）。

-流速：0.2-0.4mL/min（超高效液相兼容2.1mm內(nèi)徑柱）。

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二、質(zhì)譜系統(tǒng)（MS）參數(shù)

1.儀器類(lèi)型

-非靶向代謝組學(xué)：高分辨率質(zhì)譜（HRMS）必備，如Q-TOF（分辨率>35,000FWHM）或Orbitrap（分辨率>60,000@m/z200）。

-靶向定量：三重四極桿（QQQ），要求MRM模式，掃描速度≥500transitions/sec。

2.離子源與極性

-電離模式：ESI源（電噴霧）適用多數(shù)代謝物；APCI源適合低極性化合物。

-正/負(fù)離子模式：必須雙模式采集（覆蓋>90%代謝物）。

3.質(zhì)量精度與動(dòng)態(tài)范圍

-質(zhì)量精度：<3ppm（HRMS）確保數(shù)據(jù)庫(kù)匹配可靠性。

-動(dòng)態(tài)范圍：≥5個(gè)數(shù)量級(jí)（定量線性關(guān)鍵）。

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三、數(shù)據(jù)采集策略

1.掃描模式

-DDA（數(shù)據(jù)依賴(lài)采集）：自動(dòng)觸發(fā)二級(jí)譜，適合未知物鑒定。

-DIA（數(shù)據(jù)獨(dú)立采集）：如SWATH，無(wú)偏采集全碎片，適合大規(guī)模隊(duì)列研究。

2.分辨率與速度平衡

-HRMS全掃描分辨率≥30,000，同時(shí)保證≥10Hz掃描速率（避免峰變形）。

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四、關(guān)鍵輔助參數(shù)

1.樣本前處理兼容性

-確保方法匹配樣本類(lèi)型（血漿需除蛋白，組織需勻漿）。

2.質(zhì)控（QC）標(biāo)準(zhǔn)

-插入混合QC樣本，監(jiān)控RSD<15%（非靶向）或<10%（靶向）。

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核心建議組合

-非靶向發(fā)現(xiàn)研究：

UHPLC-Q-TOF（如SCIEX6600+）

參數(shù)：HILIC/RP雙柱+ESI±+DDA/DIA+60,000分辨率

-靶向定量驗(yàn)證：

UHPLC-QQQ（如Agilent6495）

參數(shù)：C18柱+MRM模式+同位素內(nèi)標(biāo)

>注：最終方案需匹配科學(xué)目標(biāo)——廣覆蓋選HRMS+DIA，高靈敏定量選QQQ，復(fù)雜樣本建議雙平臺(tái)交叉驗(yàn)證。務(wù)必要求服務(wù)商提供完整QC報(bào)告及原始數(shù)據(jù)格式（如.mzML）。平臺(tái)穩(wěn)定性（柱效、信號(hào)漂移）比單一參數(shù)更重要。