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原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交。使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內(nèi)RNA表達的一種原位雜交技術。其基本原理是:在細胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下,用標記的已知的RNA核苷酸片段,植物RNA原位雜交技術服務,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結(jié)合(雜交),所形成的雜交體 (Hybrids)經(jīng)顯色反應后在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細胞內(nèi)相應的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位雜交技術 經(jīng)不斷改進,其應用的領域已遠超出DNA原位雜交技術。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已 成為有效的分子病理學技術,同時在分析低豐度和罕見的mRNA表達方面已展示了分子生物學的一重要方向。

原位雜交的應用范圍:

①細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達和基因組進化的研究;

②感1染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類乳1頭狀瘤1病毒和巨細胞病毒DNA的檢測;

③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測;

④基因在染色體上的定位;

⑤檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;

⑥分裂間期細胞遺傳學的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫1瘤的診斷和生物學劑量測定等。

分子病理診斷,是指應用分子生物學技術,從基因水平上檢測細胞和組織的分子遺傳學變化,以協(xié)助病理診斷和分型、指導靶向、預測反應及判斷預后的一種病理診斷技術。分子病理診斷又稱分子病理檢查、分子病理檢測、分子病理技術。從本質(zhì)上講,凡是基于組織和細胞分子水平上的疾病診斷都是分子病理診斷,這是廣義的分子病理診斷,如組化診斷。但目前公認的是狹義的分子病理診斷,即基于細胞或組織基因水平的病理診斷。

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